I Nostri Servizi - Laboratorio Spallanzani

Immunofluorescenza indiretta (IFI)

L’immunofluorescenza indiretta (IFI) rappresenta la tecnica di riferimento per la diagnosi di laboratorio delle patologie autoimmuni ed è a tutt’oggi la più usata per le indagini di primo livello.
Il Laboratorio allega al referto un' immagine digitale dell'esame in oggetto per facilitare la diagnosi.
Il substrato adeso al vetrino è rappresentato da cellule epiteliali umane (HEp-2) o sezioni di tessuto, contenenti differenti determinanti antigenici che conferisce alta sensibilità e specificità. La scelta del substrato determinerà l’anticorpo da rivelare.

Principali auto-anticorpi ricercati in (IFI)

Così ad esempio, le cellule HEp-2 sono usate per rilevare anticorpi per antigeni nucleari (ANA), il triplo tessuto di ratto è usato sia per la conferma degli ANA sia per la ricerca di molti anticorpi citoplasmatici.

La diagnosi degli autoanticorpi anti granulociti neutrofili (ANCA) si basa prevalentemente sull’immunoflurescenza indiretta (IFA). Il gold standard per la determinazione di questi  è un mosaico BIOCHIP contenente granulociti umani fissati in etanolo e formaldeide ed insieme ad un BIOCHIP di HEp-2 e granulociti sedimentati diventa un test estremamente utile al fine di una diagnosi differenziale. Permette, infatti, la differenziazione di due tipi di ANCA: quello citoplasmico (cANCA), associato alla granulomatosi di Wegener e quasi sempre diretto contro la proteinasi 3 (PR3) e quello perinucleare (pANCA), che corrisponde ad un’ampia gamma di malattie che solitamente reagiscono bene alla terapia immunosopressiva.

Gli anticorpi anti-dsDNA sono l’obiettivo principale nella diagnosi sierologica di Lupus Eritematoso Sistemico (LES), eseguito mediante l’immunofluorescenza su substrato Crithidia luciliae (CLIFT).

Gli anticorpi anti-Saccharomyces Cerevisiae (ASCA) di classe IgA – IgG sono anticorpi diretti contro il Saccaromyces Cerevisiae: un marker per il morbo di Crohn (malattia infiammatoria intestinale che colpisce preferibilmente l’ileo terminale) anche se sono presenti solo nel 40-60% di tali pazienti. È da segnalare che gli anti-Saccharomyces Cerevisiae possono essere rilevati anche:
- Nel 50% dei pazienti affetti da celiachia, anche ad alto titolo
- Nel 20% circa dei familiari affetti dal morbo di Crohn
- In piccola percentuale nei pazienti affetti da spondilite anchilosante.

Malattia celiaca

La malattia celiaca è un’enteropatia immuno-mediata che si manifesta in soggetti geneticamente predisposti a seguito dell’ingestione di glutine, componente alcool-solubile presente in alcuni cereali come frumento, orzo e segale. La malattia celiaca risulta quindi essere una malattia multifattoriale, caratterizzata sia da fattori genetici che fattori ambientali. La malattia celiaca si manifesta con presentazioni cliniche estremamente polimorfe e variabili, che vanno dai segni tipici di malassorbimento( diarrea, calo ponderale, distensione addominale) a sintomi gastrointestinali atipici come stipsi, meteorismo, vomito, stomatite aftosa a sintomi extraintestinali come anemia sideropenica da malassorbimento di ferro, crampi, aborti ricorrenti, osteoporosi, sino a cause del tutto silenti. Questi ultimi molto spesso non sono riconosciuti e possono esporre a rischio di complicanze.
Il gold standard per la diagnosi della celiachia è rappresentato dalla dimostrazione attraverso la biopsia duodenale, della presenza delle lesioni istologiche tipiche, che regrediscono dopo l’eliminazione del glutine dalla dieta. Test sierologici estremamente sensibili e specifici hanno segnato una svolta decisiva nella diagnosi della malattia celiaca, permettendo di selezionare con estrema accuratezza chi si sottopone a biopsia.
Nella diagnostica di laboratorio per la malattia celiaca i test maggiormente utilizzati sono quelli relativi alla ricerca degli autoanticorpi anti-transglutaminasi tissutale (a-tTG) e anti-endomisio (EMA), che hanno come bersaglio l’antigene t-TG, e degli anticorpi anti-gliadina (AGA), rivolti invece contro l’antigene gliadina.
La classe anticorpale IgA anti endomisio eseguita mediante immunofluorescenza indiretta ha un’alta rilevanza diagnostica con quasi il 100% di sensibilità e specificità. La diagnosi sierologica è ugualmente indicata per il monitoraggio della terapia oltre a confermare la  diagnosi.

Di recente introduzione, con ottime prospettive per il futuro della diagnostica sierologica della malattia celiaca per la loro elevata specificità, sono gli anticorpi diretti verso i peptidi deamidati di gliadina (DGP).

Test Allergologici

L’allergia è una ipersensibilità a sostanze estranee normalmente innocue. Oltre alla predisposizione genetica, svolgono un ruolo importante anche altri fattori, come l’esposizione all’allergene, lo stato nutrizionale, le malattie croniche esistenti e le infezioni virali acute. Più frequentemente l’allergia primaria è una ipersensibilità, nella quale si formano anticorpi IgE specifici e i sintomi (rash, edema e prurito) si verificano poco dopo il contatto con l’allergene. Queste allergie sono anche chiamate reazioni di tipo immediato. Più del 15% della popolazione dei paesi industrialmente sviluppati soffre di reazioni allergiche di tipo immediato. Le tipiche reazioni allergiche sono: rinite, congiuntivite e l’asma allergica. Un aumento nella rinite allergica è stata osservata universalmente con una prevalenza del 10-40%. Si può essere allergici agli inalanti e agli alimenti.
Inalanti: Nel caso di allergie inalatorie, gli allergeni entrano in contatto con l’organismo attraverso le mucose. Gli allergeni stagionali (polline, erbe e piante aromatiche) svolgono lo stesso ruolo degli allergeni domestici (acari della polvere, animali domestici e spore di muffe) presenti tutto l’anno. I sintomi si intensificano ad ogni esposizione all’allergene e in caso di reazioni sistemiche estreme portano allo shock anafilattico.
Alimenti: l’allergia alimentare è definita come ipersensibilità IgE-mediata alle sostanze contenute nel cibo che vengono ingerite.
Gli alimenti che più frequentemente provocano reazioni allergiche includono frutta a guscio (in particolare le arachidi), soia, grano, pesce, latte e uova. I possibili sintomi sono bruciore o prurito nella cavità orale, nausea, spasmi gastrointestinali, diarrea ed eruzioni cutanee. Gravi reazioni possono anche portare ad attacchi di asma, dispnea, aumento della frequenza cardiaca e attacchi di panico e confusione, in rari casi, può verificarsi uno shock anafilattico (ad esempio frutta o pesce). Le sensibilizzazioni allergiche primarie agli alimenti svolgono un ruolo importante in particolare nei neonati e bambini, con una prevalenza che oscilla dal 5% al 10%, mentre le allergie alimentari negli adulti si verificano con un’incidenza variabile dell’1% al 5%.

SIGNIFICATO DEL CCD NELLA DIAGNOSI ALLERGOLOGICA
Molti allergeni sono glicoproteine contenenti le catene laterali dell’oligosaccaride che sono limitate alla struttura della proteina in questi allergeni.
Il Laboratorio Spallanzani adotta una tecnica di elevato valore diagnostico:EUROLINE-WB.
Una combinazione di Westernblot e line-blot in cui si utilizza gli antigeni altamente purificati o ricombinanti che vengono applicati alla strip. Per permettere le valutazioni quantitative delle strip di Westernblot, per semplificare la gestione dei dati e per fornire un rapporto dettagliato dei risultati, il Laboratorio Spallanzani  adotta un programma molto sofisticato per l’identificazione delle bande e ne misura l’ intensità. Inoltre, al referto sarà allegata una copia della strip esaminata e dell’identificazione dettagliata.  
In alcuni casi, i pazienti sviluppano gli anticorpi specifici contro queste strutture di carboidrato. Il CCD (Cross Reative Carbohydrate Determinants) può essere trovato in tantissimi allergeni di origine vegetale o animale e per la loro significativa similarità nella struttura, sono conosciuti per causare una forte reattività crociata.

Per questo motivo,  la presenza di anticorpi specifici di IgE contro CCD può fornire un’utile informazione aggiuntiva, in particolar modo con risultati positivi di IGE in disaccordo con il quadro clinico. La determinazione degli anticorpi specifici di IgE contro CCD può essere utile nei seguenti casi:
sintomi clinici in disaccordo con il risultato specifico di IgE ottenuto, molti risultati specifici positivi di IgE per alimenti vegetali, rivelazione di anticorpi specifici di IgE contro il veleno di ape o vespa senza sintomi clinici o anamnesi positiva.